黃曲霉素m1的檢測(cè)方法是什么？高效液相色譜法的原理是什么？

黃曲霉毒素M1(AFM1)，是一種有機(jī)化合物，化學(xué)式為C17H12O7，主要用于新陳代謝和致癌性的研究。2017年10月27日，世界衛(wèi)生組織國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)公布的致癌物清單初步整理參考，黃曲霉毒素M1在2B類致癌物清單中。

黃曲霉素m1的檢測(cè)方法是什么?

(1)AFM1標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

用三氯甲烷配制10μg/mL的AFM1標(biāo)準(zhǔn)溶液，用紫外分光光度計(jì)在357nm波長(zhǎng)AFM1標(biāo)準(zhǔn)溶液的準(zhǔn)確濃度(AFM1的摩爾消光系數(shù)為19950)，避光4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

(2)樣品提取

液體樣品直接加入甲醇振蕩過濾得提取液，固體樣品粉碎過篩或研磨混勻后，用一定比例的甲醇水溶液振蕩過濾得提取液。提取液可以先用石油醚和氯化鈉溶液分配凈化，再用三氯甲烷轉(zhuǎn)相提取，氯化鈉溶液水洗 ，無水硫酸鈉脫水后，收集三氯甲烷層于65℃水浴通風(fēng)揮干，最后用三氯甲烷將蒸發(fā)皿中殘留物轉(zhuǎn)移至濃縮管中，減壓吹氣法將此液濃縮至一定體積后備用。

(3)點(diǎn)樣層析、展開、測(cè)定

各取10μL樣品用濃縮液和標(biāo)準(zhǔn)液分別點(diǎn)于己在105℃活化2h的硅膠G薄層板上，置于加入一定量的展開劑的展析缸中展開，橫展和縱展相結(jié)合，揮干后在紫外燈下觀察并測(cè)量Rf值(一般AFM1的Rf值為0.34)，并與標(biāo)準(zhǔn)溶液的最低檢出量(0.0004μg)的熒光強(qiáng)度相比較，同時(shí)用硫酸溶液(1:3)顯色劑噴熒光點(diǎn)，進(jìn)行確證試驗(yàn)，最后按樣品稱 量值、濃縮體積、總稀釋倍數(shù)、標(biāo)準(zhǔn)溶液最低檢出量進(jìn)行計(jì)算。

高效液相色譜法的原理是什么?

用C18柱抽提純化樣品中的AFM1，乙醚對(duì)C18柱洗滌，再用CH2Cl2-乙醇洗脫AFM1，然后加入三氟乙酸(TFA)對(duì)AFM1進(jìn)行衍生化處理，利用液相色譜熒光檢測(cè)器檢測(cè)，并與標(biāo)準(zhǔn)AFM1-TFA的衍生物比較，進(jìn)行定性、定量分析。